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食用菌母种培养基的配制方法和配方

时间:2017-10-09 10:08:16 来源:中国食用菌网 作者: 食用菌菌种

    在菌种制备过程中,从母种到原种、栽培种,各个阶段菌丝的长势和制备的目的要求有所不同,所选用的培养基也应有所区别。
食用菌母种培养基的配制方法和配方
    1.母种培养基的配制
 
    母种培养基一般用试管作为容器,所以又称试管斜面培养基,常用于菌种分离、提纯、扩大、转管及菌种保藏。
 
    (1)常用的母种培养基配方。
 
    ①马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA):马铃薯(去皮)200g,葡萄糖20g,琼脂20g,水1000ml,也可用蔗糖取代葡萄糖,即为PSA培养基。还可以添加磷酸二氢钾3g,硫酸镁1.5g,维生素B110mg,即为马铃薯综合培养基。广泛适用于多种食用菌母种的分离、培养和保藏。
 
    ②马铃薯玉米粉培养基:马铃薯200g,蔗糖20g,玉米粉50g,琼脂20g,磷酸二氢钾lg,硫酸镁0.5g,水1000ml。本配方适合于香菇、黑木耳、猴头菌的培养。
 
    ③马铃薯黄豆粉培养基:马铃薯200g,蔗糖20g,琼脂20g,黄豆粉20g,碳酸钙10g,磷酸二氢钾1g,硫酸镁0.5g,水1000ml。适用于蘑菇、草菇。
 
    ④葡萄糖蛋白胨琼脂培养基:葡萄糖20g,蛋白胨20g,琼脂20g,水1000ml。
 
    ⑤蛋白胨、酵母、葡萄糖琼脂培养基:蛋白胨2g,酵母膏2g,硫酸镁0.5g,磷酸二氢钾0.5g,磷酸氢二钾1g,葡萄糖20g,维生素B120mg,琼脂20g,水1000ml。
 
    (2)母种培养基制作方法(以PDA为例)。首先要选择合适的浸煮容器,一般选用铝锅、搪瓷缸或玻璃烧杯等,不能用铜、铁器皿,以免铜锈或铁锈混进培养基中。配制过程及注意事项如下(图3-10)。
 
    ①计算。按照选定的培养基配方,计算各种成分的用量。
 
    ②称量。用电子天平或托盘天平称取各种物质,马铃薯应先去皮,挖去芽眼,削掉青绿部分,对一些不易称量的成分,如酵母膏比较黏稠,可先称好一根玻棒和烧杯,再把玻棒和酵母膏放在烧杯中一起称。微量元素等需要量很少,难以称准时,可先配成较浓的原液,再从中取出需要的量。
 
    ③配制。若配制合成培养基,先量取蒸馏水,加入琼脂,加热溶化;再加入称好的其他物质。为避免发生沉淀造成营养损失,加入的顺序一般是先加缓冲剂,再依次加入主要元素、微量元素和维生素等;若各种成分均不发生沉淀,也可一起加入。
 
    ④煮汁,取滤液。马铃薯切成lcm见方的小块或2~3mm厚的薄片,加水约1200ml煮沸,再用文火保持20~30min,并适当搅拌,使营养物质充分溶解出来,然后用4层预湿的纱布过滤,取其滤液。
 
    ⑤补足水量,加药品溶化。补足水量至1000ml,然后往滤液中加入琼脂,小火加热,搅拌至琼脂完全溶解,再加入葡萄糖和其他营养物质使其溶化后,用pH试纸检测其pH值,可根据需要用1mol/L的氢氧化钠或1mol/L的盐酸,调整pH值至适宜的酸碱度,进行分装。注意开锅后要适当搅拌并减小火力,防止溢出或焦底。
 
    ⑥分装试管。制备好的培养基应趁热分装,常用的试管为18mm×l80mm或20mm×200mm的玻璃试管。首先把较大的玻璃漏斗固定在滴定架上,下接一段乳胶管和玻璃管,用弹簧夹夹住胶管。分装时把热的培养基倒入漏斗中,余下的置电炉上保温,然后左手持3支试管,让玻璃管和乳胶管伸到试管的中下部,右手用弹簧夹控制培养基流量,分装量掌握在试管长度的1/4~1/5。注意分装时,培养基不能沾在试管口壁上,否则会污染棉塞。
 
    ⑦塞棉塞。分装完毕,塞上棉塞,注意棉塞要松紧适度,以用手提起棉塞而试管不脱落为度。棉塞的长度3~5cm,塞入试管中的长度约占总长的2/3。棉塞制作宜选用质量好的普通棉花,不应使用脱脂棉或夹杂腈纶棉等杂质,也可使用透气胶塞代替棉塞。
 
    ⑧灭菌和摆斜面。将塞上棉塞的试管7~10个一捆,用两层报纸或一层牛皮纸捆好,放入高压锅内灭菌。在1.2~1.5kg/cm2压力下,灭菌30min,待其压力降至零后,立即取出试管摆放斜面,原则上是摆放成斜面后,斜面的长度为试管长度的1/2~2/3,斜面顶端距试管口不少于50mm。
 
    ⑨灭菌效果检查。取3~5支斜面试管,放入28~30℃恒温箱内,空白培养24~72h,检查无杂菌污染后,方可使用。

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