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平菇液体菌种的制作

时间:2017-02-23 10:29:56 来源:原创文章 作者: 农忙十分

    一、平菇液体菌种标准及生产技术规程
平菇液体菌种的制作
    1.液体摇瓶菌种标准及生产技术规程。
 
    (1)菌种斜面菌种作为待接菌种
 
    (2)摇瓶菌种标准:
 
    ①外观形态:菌液澄清、棕黄色液体、菌丝呈放射状, “菌球”味感有水果香味、稍酸、菌球量占30%以上。
 
    ②镜检形态:美蓝单染色后观察,菌丝着色深、均匀、粗壮、分枝呈树枝状。侧丝线形、顶端稍弯曲、生长点多见,可见大量椭圆形分生孢子,无杂菌污染,无明显空泡,有锁状联合。
 
    (3)液体摇瓶生产技术规程:
 
    ①工艺流程:母种       一级摇瓶种子        二级摇瓶发酵。
 
    ②培养基配方:蛋白胨1.5%、酵母膏0.1%、麦芽糖1%、葡萄糖2%、杨树木屑5%、硫酸镁0.075%、磷酸二氢钾0.15%、维生素B10. 01%、pH值6.5(消前)。
 
    ③制法:按配方规定量准确称取各药品,加一定量水加热溶解,定容至规定量,杨树木屑加水浸煮,温火下30~40min,用八层纱布过滤取滤汁,充分拌匀后分装于三角瓶中(500ml三角瓶装量至200ml)塞上棉塞(棉塞包扎纱布)上覆牛皮纸,置高压蒸汽灭菌锅灭菌(1kg/㎝2)30min,取出检验无杂菌污染备用。
 
    ④接种:在无菌条件下,按斜面与摇瓶之比为1:5(斜面比摇瓶)的比例接种。一般一只斜面母种可接500 ml三角瓶2~3瓶。取一支带长把的铁环,环上缠绕纱布后,吸足95%酒精,点燃后套在大三角瓶瓶口上,形成一道“火圈”,阻止杂菌侵入,将斜面母种挖块后,经“火圈”中心接入瓶内,每瓶不少于3块(0.6×0.5㎝/块)。
 
    ⑤培养:要求培养温度22℃±2℃,旋转式摇床的转速为170~200转/min,光线以黑暗为佳。
 
    ⑥培养终止时间为7d。
 
    2.液体种子罐培养菌种及生产技术规程
 
    (1)菌种:使用平菇经摇瓶培养的液体菌种,选用新培养的摇瓶菌种,菌龄不超过7d,菌球不能中空,不能有太多空泡。
 
    (2)种子罐培养菌种标准:
 
    ①外观形态:基本同摇瓶种子,只是菌球量要占50%以上,pH值为6.5,若菌丝已经中空,表明菌球中部菌丝已老化,部分菌丝自溶。菌丝在培养中呈絮状,菌球表面有刺,说明菌种旺盛;
 
    ②镜检:同摇瓶菌种。
 
    (3)液体种子罐生产技术规程:
 
    ①培养基配方:葡萄糖2%、麦芽糖1%、玉米浆0.5%、杨树木屑(杨树树皮)5%、酵母膏0.2%、硫酸镁0.05%、磷酸二氢钾0.1%、消沫油0.1%、pH值6.5(消前);
 
    ②制法:按规定量准确称取各药品(柞木屑或柞树皮)加水浸煮,温火下30~40min,用八层纱布过滤取滤汁,加入适量水加热溶解,搅匀,投料量(加水后)约占罐容积的70%(经视窗口加液),扭紧封严视窗,加温至121℃,实罐蒸汽灭菌40min,菌检,无杂菌污染,保压冷却至26℃接种;
 
    ③接种与培养:接种量为10%,将视窗盖取下,在视窗基部套上火焰圈,点燃火焰圈,迅速经视窗口将三角瓶液体种子倒入种子罐中,及时扭紧封严视窗,熄灭火焰圈,通无菌过滤空气,空气流量每分钟1:1~1:1.5(V/V),罐内温度为22℃±2℃,罐压0.5kg/㎝2,培养3~4d;
 
    ④放罐指标:有水果香味,pH值降至3.6~4.0,还原糖降至0.9%以下,残糖0.5~0.4%,菌丝体稠密,培养液粘度增大,菌丝量不再增加或稍有下降,镜检无空泡或空泡较少,就应及时放罐,约培养7d左右无杂菌污染,可留作菌种用。
 
    二、液体菌种的关键技术
 
    1.空气过滤:液体菌种要求通无菌空气,空气过滤就成了生产成败的一个主要因素。
 
    2.通气量的控制:也就是供氧量的控制。菌丝是吸收溶解其中的氧气来维持自身的新陈代谢。一般来说,在压力和温度一定的情况下,通气量再大,也不会增加液体中氧气的含量。但是,目前的罐一般都是气体搅拌,量少了,搅拌和氧气量不够。多了,搅拌剧烈,菌球形状不好,而且还浪费能源。这样,就要设计一个最佳的方案。
 
    3.质量的检测:液体菌种生产出来后,经验少的人不知道菌种质量好坏,特别是没有经过培训的人,更是不知道怎么办。如果直接就接下去,可能造成大规模污染,损失是巨大的。因此液体菌种的质量检测就是新人的必修课题。
 
    需要说明的是电磁搅拌器生产的液体菌种是菌丝团,而摇瓶机法、简易深层发酵(吹氧)法、发酵罐法生产出来的液体菌种一般是菌球。
 
    三、液体菌种的工艺流程及生产要点
 
    工艺流程图:
 
    空气压缩→过滤
 
    ↓
 
    配料→装罐→灭菌→冷却→接种→培养→液体种
 
    ↑
 
    试管斜面种→ 三角瓶液体母种
 
    1.试管种的生产
 
    2.三角瓶液体菌种生产
 
    用电磁搅拌器或摇瓶机进行生产。整个过程要7天时间,生产的液体种稍经加工就可以直接使用。
 
    3.发酵罐生产
 
    生产时要先进行培养料的配制。配料时先将土豆去皮切片,与麸皮混合后用不锈钢锅煮熟并取汁,再将辅料KH2PO4、MgSO4等溶入,混匀后装入罐中,也可将免煮培养基直接加入到罐内加热,125℃维持40分钟到一小时左右进行灭菌,灭菌结束后用冷水冷却至培养温度,而后将并瓶后的三角瓶专用种接到罐内进行培养,培养时根据不同的菌种,设定适宜的温度。
 
    培养期间应注意观察菌球出现的时间、颜色和排出气体的气味等,控制好压力。如遇到停电,关闭排气阀来保持罐中处于正压状态。来电后重新启动,并打开排气阀继续培养。培养过程中,可随时采样分析,几天后待菌球密度符合要求时(从视镜或排料观察),即可接种。
 
    四、液体菌种的检测方法
 
    1.菌球的形态:菌种长好后会看到大小均匀、活力旺盛、毛刺明显的大量的菌球,静止5分钟后菌球点菌液浓度的80%以上或不分层。若菌球很少或大小不一,则可能是质量有问题。
 
    2.菌液澄清度:菌液中除菌球外无其它固形物,菌液由前期的微浑浊变得澄清或橙黄色。如变得浑浊不清则很可能是染菌。
 
    3.菌液气味:到培养后期菌液的糖香味会逐渐消失,取而代之的是或有或无的菌种特有的清香味。若有臭味、酸味、霉味则是染菌。
 
    4.不知道是什么:若依以上指标还不能判断菌种的质量,还可将菌种接到空白试管上,放在20-25℃条件下静止48小时左右,若表面菌种萌发明显,且无其它颜色的孢子,则多为正常,若有其它特殊颜色则为污染。
 
    五、发酵罐生产
 
    生产时要先进行培养料的配制。配料时先将土豆去皮切片,与麸皮混合后用不锈钢锅煮熟并取汁,再将辅料KH2PO4、MgSO4等溶入,混匀后装入罐中,也可将免煮培养基或公司提供的专用培养基直接加入到罐内加热灭菌,125℃维持40分钟到一小时进行灭菌,灭菌结束后用冷水冷却至30℃以下。将并瓶后的三角瓶专用种在火焰的保护下接到罐内进行培养,培养时根据不同的菌种,设定适宜的温度。
 
    培养期间应注意观察菌球出现的时间、颜色和排出气体的气味等,压力控制在**Mpa。如遇到停电,关闭排气阀来保持罐中处于正压状态。来电后重新启动,并打开排气阀继续培养。培养过程中,可随时采样分析,几天后待菌球密度符合要求时(从视镜或排料观察),即可接种。
 
    六、接种
 
    液体菌种生产结束后,在检测合格的情况下,就要进行接种。接种前要先将接种枪、连接管道用棉花塞上,放到高压锅里进行灭菌。121℃20分钟就行了。与此同时,将接种机打开工作。在接种时,前几枪不要接到栽培袋里,应该先喷到量筒里,以检查接种量的大小。全部接种过程都要在接种机下进行。
 
    1.接种技术:接种技术对于固体来说应该没什么的,可以在液体菌种上,是有说法的。特别是一些特别品种,在接种时应该特别注意。
 
    2栽培料的含水量和接种量的控制:这一项没做好,是好多人做液体菌种失败的一个重要原因。需要一些计算公式和方法。
 
    液体菌种制作与士兵用枪射击是一个道理,其实一般的人也会射击,可是要想一枪毙命,正中眉心,就不是一般人能做到的了,要经过系统的学习和训练。理论上说的是一回事,实际上做的又是一回事。
 
    正常情况下,经过系统培训的人,在做液体菌种时,成功率应该在95%以上。能熟练掌握试管的制作、搅拌器和摇瓶机的液体菌种制作技术,能自己一个人操作液体菌种发酵罐、懂得不同品种的接种技术。经常做的人,应该在98%以上,甚至更高。这里面除了技术外,还有设备的问题。

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